为什么设计出来的引物退火温度过高?我使用的是oligo软件

为什么设计出来的引物退火温度过高?我使用的是oligo软件 我设计了引物,结果生物公司合成的引物退火温度比我设计的低10度,为什么,我用哪个退火温度 为什么生物公司合成的引物退火温度比设计的温度要低10度,我用哪个! ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? 我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? 关于引物的退火温度?为什么用公式计算的引物退火温度和试剂公司送来的合成报告单上的退火温度不一致? pcr引物退火温度55度时不行,58度可以,为什么在做PCR时,引物用55度的退火温度扩不出来,而用58度却扩出来了,为什么 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR长的目的片段需要注意什么我设计的引物溶解温度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的时间退火温度56度P出来几百bp的片段,然后又延长退火时间到4 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!文献上62摄氏度,我感觉有点不对劲啊!给出PCR退火温度的计算的方法！谢谢·· 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? 带酶切位点的引物设计问题带酶切位点的引物设计时计算Tm值,退火温度及GC含量时是否要把酶切位点和保护碱基计算在内?我觉得不用,因为酶切位点可以不用跟模板结合, 用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度Tm,看哪个? 引物退火温度是53度,如何设置两个梯度的退火温度 一些通用引物的退火温度?比如m13 如何进行引物退火温度的梯度设置