SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么?想知道溶液1的成分及其作用!溶液2,溶液3也想知道!

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/03 14:43:50
SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么?想知道溶液1的成分及其作用!溶液2,溶液3也想知道!

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SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么?
想知道溶液1的成分及其作用!溶液2,溶液3也想知道!

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溶液Ⅰ 50mM 葡萄糖 / 10mM EDTA / 25mM Tris-HCl,pH=8.0
葡萄糖增稠,使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA 抑制DNase的活性.这一步溶液中还可以加入RNase,不受EDTA影响,并且可以在后续步骤中被除去
溶液Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS
破细胞的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提.
溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸
这一步的K置换了SDS（十二烷基磺酸钠）中的Na,得到PDS（十二烷基磺酸钾）沉淀；SDS易与蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了,同时基因组DNA也被PDS共沉淀

溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液，没有什么实际意义，可以不要。
溶液2是碱液，目的在彻底破坏细胞膜，释放核酸。
溶液3是酸性钾盐溶液，目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA。
我记得就是这样了，因为没有附加分所以就不去查证了，楼主姑妄听之。...

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溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液，没有什么实际意义，可以不要。
溶液2是碱液，目的在彻底破坏细胞膜，释放核酸。
溶液3是酸性钾盐溶液，目的是中和碱性并且沉淀SDS同时被沉淀的还有蛋白和大片段线性DNA。
我记得就是这样了，因为没有附加分所以就不去查证了，楼主姑妄听之。

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I， 含有EDTA，利于悬浮，可以说是提高得率的一步。有时候也在I中加 RNase，去除细胞中的RNA，一般4°保存。
Ⅱ， 破解细胞的，完了之后一般会变粘稠，这就是遗传物质出来了，
Ⅲ， 是来沉淀蛋白质的

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