分子克隆的时候,提出的质粒用菌落PCR是阳性的,但是酶切鉴定的时候却没有切出来目的条带,是怎么回事呢?

分子克隆的时候,提出的质粒用菌落PCR是阳性的,但是酶切鉴定的时候却没有切出来目的条带,是怎么回事呢? 菌落PCR技术鉴定阳性重组菌落PCR扩增的序列是环状的质粒,还是线性的质粒呢?那载体通用引物是什么呢?用它扩增的是哪段序列呢? 菌落PCR有带,可提取的质粒没带!请问我转化的单菌落做菌落PCR有带,单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀?引物是特异性的! 要克隆一段基因,什么情况用PCR,什么情况用重组质粒分子克隆法? 重组质粒转化大肠杆菌,几乎全是假阳性.挑了26个菌做菌落PCR只有3个阳性克隆.为什么假阳性那么多呢?会不会是感受态在-70度放得时间长了,不好用了.还是没有酶切好?用的是BamH I和Hind Ⅲ限制 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 （鉴定质粒表达）比较菌落PCR和提质粒酶切这两种方法的优缺点,为什么需要两次鉴定? PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有 在PCR技术发明以前,人们是怎么做分子克隆的?限制性内切酶是70年代发现的PCR是83年才发明的今天在做实验的时候突然想,没有PCR的时候,研究者是怎么克隆基因的呢?但是PCR技术之前就有基因克 菌落PCR的具体操作方法 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多 我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 请问用PCR克隆已知基因的步骤中为何要将回收的目的基因重组在大肠杆菌质粒上去呢? 关于菌落pcr我的做法是： 用枪头挑选单菌落到装有10uL水的pcr管中,然后悬浮菌液. 在做 PCR 时,吸取 2uL 做摸板,但电泳检测后,选有阳性克隆相对的菌液 8uL 与试管的液体培养基中培养.这样做, 关于T-A克隆的一些问题我做完了T-A克隆,提取质粒以后,用我的目的基因引物做PCR,跑电泳跑出来了目的条带,但是有一些杂带,是怎么回事呢.