作业帮动物肝脏研磨而成的匀浆液离心后的结果剪碎后加2倍组织冷的0.14mol/lNacl 和0.15mol/l的EDTA溶液后研磨成的匀浆
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/28 00:48:19
动物肝脏研磨而成的匀浆液离心后的结果剪碎后加2倍组织冷的0.14mol/lNacl 和0.15mol/l的EDTA溶液后研磨成的匀浆
动物肝脏研磨而成的匀浆液离心后的结果
剪碎后加2倍组织冷的0.14mol/lNacl 和0.15mol/l的EDTA溶液后研磨成的匀浆
动物肝脏研磨而成的匀浆液离心后的结果剪碎后加2倍组织冷的0.14mol/lNacl 和0.15mol/l的EDTA溶液后研磨成的匀浆
DNA提取的实验步骤：
1．取新鲜动物肝,除去结缔组织,用0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液洗去血液.在冰浴中切成小块,称取10g,加入两倍体积0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液,于研钵中研磨至匀浆,以3000r／min的转速离心10min.
•2．在上述沉淀物中加入0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA溶液,使总体积为20mL,然后在60℃下,滴加20％SDS溶液1mL,边加边搅拌,再摇动10min,使核酸与蛋白质分离.
•3.边搅拌边加固体氯化钠2g,使其最终浓度达到l.4mol／L,再摇10min.
•4．加等体积的氯仿一异戊醇,轻混,静置,离心管内的物质分为三层,上层为含DNA的水相层,下层为氯仿一异成醇混合物,中间层为变性蛋白凝胶.吸出上清液,倒入另一离心管.
•5．加1/2体积的氯仿一异戊醇混合液,振摇20min,以3000r／min的转速离心10min.
•6．吸出上清液,加入2倍体积95％乙醇溶液（预冷）,产生沉淀.
·①用玻棒搅拌,DNA的丝状物即缠在玻棒上,用80％乙醇溶液洗涤一次.
·②再以4000r／min的转速离心溶液10min,弃去上清液,沉淀用80％乙醇溶液再离心洗涤一次.
•7．将沉淀置于吸水纸上,除尽乙醇,室温自然干燥后,加入1ml 蒸馏水,使DNA充分溶解,待用.
核酸提取过程中的注意事项：
（1）避免过酸过碱或高温环境,合适的T：0－4℃,
pH4-9；
（2）防止机械力的切割作用,避免剧烈振荡；
（3）防止核酸酶的降解作用,可加入抑制剂－EDTA,柠檬酸钠；
（4）整个操作步骤应尽量简化,缩短实验过程,减少核酸变性、降解、机械切割的机会.
得到的是DNA粗提取液.